治疗基因VEGF165和报告基因NIS共表达载体的构建和鉴定

• 作者: 张淼 李彪 王利华 石朔 郭睿
• 来源期刊: 诊断学理论与实践
• 学科: 医学
• 关键词: 治疗基因 报告基因 血管内皮生长因子 钠碘同向转运体 共表达
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 423-427
• 分类号: R817.4
• 字数: 3942字
• 语种: 中文

摘要

目的:利用内部核糖体进入位点(IRES)序列,构建含有血管内皮生长因子(VEGF165)和人钠碘同向转运体( NIS)的真核双表达载体pIRES-VEGF165-NIS,并在体外检测NIS蛋白和VEGF165蛋白在HEK293细胞中的表达.方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增得到目的基因VEGF165和NIS,通过酶切将其连接克隆至pIRES载体以构建pIRES-VEGF165-NIS质粒,再通过脂质体将构建好的质粒转染人HEK293细胞,并采用蛋白印迹法和免疫荧光法检测VEGF165和NIS蛋白的表达.结果:成功构建了双基因双表达载体pIRES-VEGF165-NIS,且其受巨细胞病毒(CMV)极早期基因启动子调控.蛋白印迹法检测显示,VEGF165和NIS可同时在HEK293细胞中表达,而免疫荧光显示转染的HEK293细胞可同时表达VEGF165蛋白和NIS蛋白.结论:IRES序列调控VEGF165和NIS双基因可在细胞中同时独立表达,为进一步构建双基因表达重组腺病毒,并利用人NIS作为报告基因,实时监测VEGF165治疗基因的表达和分布奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭睿	上海交通大学医学院附属瑞金医院核医学科	16	15	2.0	3.0
2	李彪	上海交通大学医学院附属瑞金医院核医学科	74	204	7.0	11.0
3	张淼	上海交通大学医学院附属瑞金医院核医学科	20	70	5.0	7.0
4	王利华	上海交通大学医学院附属瑞金医院核医学科	5	1	1.0	1.0
5	石朔	上海交通大学医学院附属瑞金医院核医学科	3	0	0.0	0.0