日本血吸虫Sj Cyclophilin B基因的克隆、表达及免疫保护效果分析

• 作者: 傅志强 刘金明 彭金彪 林矫矫 洪炀 王艳 石耀军 程国锋 郭凡吉 韩宏晓
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 农学
• 关键词: 日本血吸虫 Cyclophilin B(CyPB) 克隆和表达 免疫保护效果
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术
• 页码范围: 317-323
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 语种: 中文

摘要

本研究克隆和表达了日本血吸虫Cyclophilin B(Sj CyPB)编码基因的Cdna,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果.本研究以日本血吸虫童虫Cdna为模板,RT-PCR扩增其基因全长Cdna,提交序列到NCBI,登录号为GQ403665.荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,构建重组表达质粒,表达纯化重组蛋白.利用Western blotting检测重组蛋白的抗原性.以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果.结果表明,RT-PCR获得了Sj CyPB编码基因的全长Cdna,其开放阅读框为672 bp.经分析确定其为CyPs家族中的CyPB基因,命名为Sj CyPB.荧光实时定量PCR分析表明,该基因在18 d童虫期表达量最高,32d次之.构建了重组表达质粒Pgex-6P-1-SjCyPB,并在大肠杆菌中成功表达,表达产物分子量为49.5 kDa.Western blotting试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得31.5%的减虫率和41.01%的肝脏减卵率.本研究获得了日本血吸虫童虫期高表达的Sj CyPB基因的全长Cdna,成功构建了Sj CyPB原核重组表达质粒,并在大肠杆菌中成功表达,证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果.