旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因的克隆与原核表达

• 作者: 付宝权 姚菊霞 张德林 曲自刚 李文卉 王艳华 王鸿盛 盖文燕
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 旋毛虫 丝氨酸蛋白酶抑制因子 重组蛋白 抗原性
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 470-474
• 页数: 5页
• 分类号: S852.731
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Tsserpin)基因序列设计1对引物,从旋毛虫肌幼虫提取总RNA,应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,进行限制性酶切后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-Tsserpin,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,经PCR、限制性酶切分析及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行了诱导表达.SDS-PAGE分析表达产物,表达产物纯化后用Western-blotting鉴定Tsserpin重组蛋白的抗原性.PCR与酶切鉴定结果显示,构建的重组表达质粒pET30a-Tsserpin与预期结果一致.测序结果表明,插入片段为1122 bp,编码373个氨基酸,与GenBank中旋毛虫Tsserpin基因的相似性为99%.含有pET30a-Tsserpin重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE分析结果显示,表达产物的分子质量约为48.5 ku,而且主要以包涵体形式存在.Western-blot分析结果表明Tsserpin重组蛋白可以被旋毛虫感染猪阳性血清特异性识别,提示其具有良好的抗原性,可以作为猪旋毛虫病免疫诊断的候选抗原.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付宝权	中国农业科学院兰州兽医研究所	22	29	3.0	4.0
2	王艳华	中国农业科学院兰州兽医研究所	15	66	4.0	8.0
3	张德林	中国农业科学院兰州兽医研究所	20	168	8.0	12.0
4	李文卉	中国农业科学院兰州兽医研究所	8	3	1.0	1.0
5	盖文燕	中国农业科学院兰州兽医研究所	3	0	0.0	0.0
6	曲自刚	中国农业科学院兰州兽医研究所	5	0	0.0	0.0
7	姚菊霞	中国农业科学院兰州兽医研究所	2	0	0.0	0.0
8	王鸿盛	中国农业科学院兰州兽医研究所	2	3	1.0	1.0