牛朊蛋白基因prnp敲除载体的构建及真核细胞转染

• 作者: 兰杰 宋永利 张海林 张涌 程胖
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 农学
• 关键词: 基因打靶 正负筛选策略 朊蛋白 牛胎儿成纤维细胞 prnp 间接免疫荧光 Western blotting
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术
• 页码范围: 297-304
• 页数: 8页
• 分类号: S8
• 语种: 中文

摘要

利用正负筛选策略(Positive-negative selection,PNS)对中靶细胞进行富集是提高体细胞基因打靶效率常用的策略之一.将动物的朊蛋白基因prnp敲除,使其不能表达朊蛋白(传染性海绵状脑病的致病蛋白),从而使其具有抵抗Prion病感染的能力.本研究采用正负筛选策略,构建了牛prnp基因的双等位基因敲除载体,经内切酶Sac II线性化后,再通过电穿孔转染牛胎儿成纤维细胞,分别用600 μg/mLG418、200nmol/mLGanciclovir(GCV)进行正负药物筛选,最终获得了176个药物抗性细胞克隆,进一步采用PCR、测序、间接免疫荧光试验及Western blotting试验对细胞克隆进行鉴定,结果表明,其中的9个细胞克隆为中靶细胞,证明牛prnp基因被成功敲除.本研究为牛prnp的敲除提供了可行性依据,并为体细胞核移植生产敲除朊蛋白基因的转基因动物提供供体细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张涌	西北农林科技大学动物医学院	105	815	13.0	25.0
2	张海林	西北农林科技大学动物医学院	2	4	1.0	2.0
3	程胖	西北农林科技大学动物医学院	2	4	1.0	2.0
4	兰杰	西北农林科技大学动物医学院	3	15	3.0	3.0
5	宋永利	西北农林科技大学动物医学院	3	7	2.0	2.0