PD-1核心启动子的获得及活性鉴定

• 作者: 侯建伟 张伟 张英起 徐玉金 李晶 秦鑫 舒震 赵薇 陈霖
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: PD-1 核心启动子 双萤光素酶报告基因 转录调控
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 319-322
• 分类号: Q78
• 字数: 3102字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.03.005

摘要

目的:构建PD-1(programmed death receptor 1)全长启动子及不同截短体的报告基因,并对其转录活性进行检测.方法:通过PCR及双酶切方法,从人全血基因组DNA中获得PD-1基因编码序列,包含不同长度碱基的PD-1启动子序列,分别克隆到报告基因pGL3-Basic载体上,构建8个不同长度PD-1启动子的报告基因;用脂质体转染法将8个报告基因分别转染至Jurkat细胞系;采用双萤光素酶报告基因系统评估PD-1启动子的活性.结果:经PCR方法扩增出大小分别为1650、1450、1250、1128、874、674、474和274 bp的不同长度的PD-1启动子序列,测序正确(与GenBank报道一致),酶切鉴定正确;瞬时转染Jurkat细胞系后经报告基因检测,8个启动子均具有转录活性.结论:构建了PD-1启动子的报告基因,并证实均有转录活性,且以pGL3-1128活性最高,为PD-1的核心启动子,为进一步研究PD-1的转录调控奠定了实验基础.