人MCM7 N-端融合蛋白的原核表达、纯化及其与AR蛋白相互作用的研究

• 作者: 余金喜 师以康 顾黎
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: MCM7 AR 蛋白相互作用 GST融合蛋白
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 44-48
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的:制备人MCM7 N-端的GST融合蛋白(GST-MCM7N),研究其是否和雄激素受体(AR)蛋白存在直接的相互作用.方法:利用RT-PCR获得长度为744 bp的人mcm7基因N-端cDNA碱基片段,把该片段构建到原核表达载体pGEX-5x-3中,转化大肠杆菌BL-21菌株.经IPTG诱导菌株基因表达产生了GST-MCM7N融合蛋白;使用Glutathione Sepharose 4B球珠分离纯化.利用GST pull-down技术把纯化的融合蛋白分别和前列腺癌细胞LNCaP细胞裂解液及基因工程获得的AR蛋白孵育,检测MCM7蛋白的N-端是否和AR蛋白直接相互作用.结果:酶切鉴定及基因测序表明,mcm7基因cDNA的N-端片段被构建到表达载体pGEX-5x-3中;SDS-PAGE及Westernblotting结果分别显示,获得了GST和GST-MCM7N融合蛋白;GST pull-down结果证实GST-MCM7N和AR蛋白存在相互作用.结论:MCM7蛋白的N-端和AR蛋白至少在体外可以发生直接的相互作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	顾黎	山东大学国家糖工程技术研究中心	16	183	7.0	13.0
2	余金喜		4	61	4.0	4.0
3	师以康	山东大学国家糖工程技术研究中心	4	22	3.0	4.0