Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶重组腺病毒载体的构建、鉴定及初步应用

• 作者: 任峰 刘加宝 屈睿 桑建荣 赵爽 陈永昌
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶 腺病毒载体 DNA重组 胞外信号调节激酶
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 36-39,51
• 页数: 5页
• 分类号: Q257
• 字数: 3477字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2010.01.009

摘要

目的: 构建携带Ⅱ型cGMP依赖性蛋白激酶(PKGⅡ)基因的重组腺病毒载体,并以此初步研究PKGⅡ对增殖相关的MAPK信号转导的影响.方法: 将PKGⅡ cDNA片段自载体pRC/CMV-GKⅡ(wt)中切出,克隆至穿梭质粒pENTR 1A,用ClonaseⅡ将pENTR-PKGⅡ中的PKGⅡ cDNA片段定向克隆到pAd/CMV/V5-DEST中构建pAd/CMV/V5-DEST-PKGⅡ(Ad-PKGⅡ).重组质粒Ad-PKGⅡ用PacⅠ酶酶切,使其线性化,再用脂质体转染法转染HEK293A细胞进行包装和扩增,微量全细胞病变法检测病毒滴度,蛋白质印迹法检测重组腺病毒Ad-PKGⅡ感染细胞后PKGⅡ的表达以及MAPK通路关键成分胞外信号调节激酶(ERK)活性的变化.结果: 重组腺病毒滴度达5×109 pfu/ml,蛋白质印迹法检测显示重组腺病毒感染CS54细胞后使其PKGⅡ表达明显增高;在BGC-823胃癌细胞株, PKGⅡ对EGF导致的ERK的激活有明显抑制作用.结论: 成功构建了携带PKGⅡ基因的重组腺病毒,初步证明PKGⅡ对细胞增殖相关信号转导有抑制作用,为进一步研究PKGⅡ与肿瘤细胞发生发展的关系提供了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	屈睿	江苏大学基础医学研究所生理学研究室	3	29	2.0	3.0
2	陈永昌	江苏大学基础医学研究所生理学研究室	59	228	8.0	11.0
3	任峰	江苏大学基础医学研究所生理学研究室	7	11	2.0	2.0
4	桑建荣	江苏大学基础医学研究所生理学研究室	13	70	4.0	8.0
5	赵爽	江苏大学临床医学院	10	17	2.0	3.0
6	刘加宝	江苏大学临床医学院	1	1	1.0	1.0