果蔗SoSgt 1基因的克隆表达与植物反义表达载体的构建

• 作者: 吴子峰 周以飞 张绪璋 林生 潘大仁 陈观水
• 来源期刊: 热带生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 果蔗 SoSgt 1基因 克隆 半定量RT-PCR 载体构建
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: Q781
• 字数: 4064字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7054.2010.01.001

摘要

利用不同作物的Sgt 1基因的SGS保守区域的氨基酸保守位点设计简并引物,从果蔗的cDNA中克隆分离出果蔗SoSgt 1基因片段.以果蔗SoSgt 1基因片段为探针,利用电子克隆和序列拼接方法并通过RT-PCR验证获得了一个全长1 438 bp的cDNA序列.通过ORF软件分析,预测得到的蛋白质具有362个氨基酸.利用NCBI数据库中的Protein Blast分析SoSgt 1蛋白氨基酸序列,得出含有SGT 1蛋白的3个典型的保守结构域(TPR,CS和SGS),与其他作物的SGT 1蛋白比较具有较高的相似性.利用梢腐病病原Gibberella fujikuroi接种福安果蔗叶片,检测到SoSgt 1基因的转录水平逐渐提高,并用果蔗SoSgt 1基因的cDNA片段设计2个酶切位点,反向插入到植物真核表达载体pCAMBIA1301,构建反义表达载体pCAM-SGT.