人MEPE基因稳定表达细胞系的建立及MEPE蛋白在DNA损伤应答中的功能初探

• 作者: 于芳 林宇翔 绳纪坡 胡宝成 马祖兴 高宁
• 来源期刊: 军事医学科学院院刊
• 学科: 生物学
• 关键词: MEPE/OF45 基因表达 细胞系 DNA损伤
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 123-126
• 分类号: Q75
• 字数: 4378字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2010.02.006

摘要

目的 构建人MEPE基因真核表达载体,稳定转染人胚肾293T细胞,并建立稳定表达细胞株;初步探讨人MEPE蛋白在DNA损伤应答中的作用.方法 将人MEPE cDNA克隆至带有HA标签的真核表达载体pREP10上,构建重组质粒;分别将载体pREP10/MEPE-HA和pREP10/HA转染293T细胞;经潮霉素B加压筛选阳性克隆;用RT-PCR和免疫印迹方法分别在RNA水平和蛋白水平鉴定稳定表达MEPE-HA融合蛋白的阳性细胞株;利用一定浓度的DNA损伤诱导剂喜树碱(camptothecin, CPT)处理细胞,通过MTT比色法检测不同时间点细胞存活率的变化,其趋势即可反映出不同细胞株对DNA损伤诱导剂的敏感性.结果 经酶切鉴定及序列分析,人MEPE基因真核表达载体pREP10/MEPE-HA构建正确,转染人293T细胞,筛选出MEPE表达较高的细胞株,并且发现该基因的高表达可以使细胞对DNA损伤诱导剂的耐受性提高.结论 成功建立了稳定表达人MEPE的293T细胞株,并对人MEPE蛋白在细胞中对DNA损伤诱导剂敏感性的影响进行了初步探讨,为进一步研究MEPE的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林宇翔	军事医学科学院生物工程研究所医学分子生物学实验室	5	3	1.0	1.0
2	绳纪坡	军事医学科学院生物工程研究所医学分子生物学实验室	18	50	4.0	6.0
3	于芳	军事医学科学院生物工程研究所医学分子生物学实验室	27	68	5.0	7.0
4	胡宝成	军事医学科学院生物工程研究所医学分子生物学实验室	35	154	5.0	11.0
5	高宁	军事医学科学院生物工程研究所医学分子生物学实验室	25	56	3.0	6.0
6	马祖兴	军事医学科学院生物工程研究所医学分子生物学实验室	3	2	1.0	1.0