小鼠附睾特异性辅脂酶的原核表达及其抗体的制备

• 作者: 关艺青 潘善培 禹艳红 黄丹
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 附睾 辅脂酶 原核表达 抗体
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 105-110
• 分类号: R715.2
• 字数: 5118字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2010.02.001

摘要

目的:利用原核表达系统重组表达小鼠附睾特异性辅脂酶(meClps),并制备抗meClps抗体.方法:通过生物信息分析meClpe蛋白结构,Oligo 6设计引物,PCR法从小鼠附睾cDNA中扩增meClps全长序列并克隆到pMD19-T载体中.将含meClps序列pMD19-T载体通过PCR扩增成熟肽区段序列,重组到pET-21b原核表达载体上,经菌落PCR及测序鉴定后,转化到表达菌株E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导蛋白表达后用Tricine-SDS-PAGE和Western blotting检测重组meClps的表达.包涵体沉淀经浓度为2 mol/L尿素洗涤,Tricine-SDS-PAGE分离、染色、脱色,切下目的条带用生理盐水浸泡、磨碎与弗氏佐剂混合后免疫新西兰大白兔获取免疫血清,Western blotting检测抗体与meClps反应.结果:在原核表达系统成功重组表达meClpe,目的蛋白主要以包涵体形式存在,制备了高效价的兔抗meClps抗体.结论:成功建立meClps的原核表达系统和获得兔抗mops抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	潘善培	暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所	32	144	7.0	9.0
2	黄丹	暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所	15	80	5.0	8.0
3	关艺青	暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所	5	15	2.0	3.0
4	禹艳红	暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所	5	14	2.0	3.0