小鼠Bpi条件基因打靶载体的构建和鉴定

• 作者: 侯宁 吕喆 孔庆利 安云庆 康赟 林福玉 滕艳 程萱
• 来源期刊: 实验动物科学
• 学科: 医学
• 关键词: 杀菌/渗透性增强蛋白(Bpi) 条件基因打靶载体 同源重组 Cre/LoxP系统
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 15-20
• 分类号: R373
• 字数: 3317字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-6179.2010.04.004

摘要

目的 构建小鼠Bpi条件基因打靶载体,为建立Bpi条件基因打靶小鼠模型和深入研究Bpi基因功能奠定基础.方法 采用Cre/LoxP系统,选择小鼠Bpi基因第2、3外显子作为条件性敲除的目的 片段,并在其两侧插入LoxP位点;运用LA-PCR技术,以129品系小鼠ES细胞基因组DNA为模板分步扩增包括Bpi第2、3外显子(中间同源臂)和上游同源臂在内的3,1 kb基因片段以及下游同源臂4.9 kb基因片段;构建pBSK Ⅱ-5SLoxP和ploxPFRTNeo-3L重组质粒,将前者酶切产物(3.1 kb)与酶切后的ploxPFRTNeo-3L质粒相连获得Bpi条件基因打靶载体.结果 经多个限制性内切酶酶切鉴定和测序证实,构建的pBSK Ⅱ-5SLoxP、ploxPFRTNeo-3L重组质粒和Bpi条件基因打靶载体结构正确,与设计相符.结论 成功构建了小鼠Bpi条件基因打靶载体.