沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/氧化酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 刘静雯 周集体 杜翠红
• 来源期刊: 海洋与湖沼
• 学科: 生物学
• 关键词: 沼泽红假单胞菌 核酮糖-1 5-二磷酸羧化酶/氧化酶(RubisCO) 基因克隆 大肠杆菌 重组表达
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 315-321
• 分类号: Q943
• 语种: 中文

摘要

核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/氧化酶(RubisCO)(EC 4.1.139)是光合细菌通过卡尔文循环固定二氧化碳的关键酶.本文采用PCR方法,从沼泽红假单胞菌株No.9中克隆到RubisCO基因(cbbM)序列(该序列已提交GenBank,登录号:GU061327).采用同源建模法,建立了该RubisCO蛋白的三维结构模型,预测其活性位点.将cbbM基因亚克隆到表达载体pTV118N上,构建表达质粒pTV-CBBM,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株BL21(DE3)/pTV-CBBM,该菌株经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE检测.采用气相色谱法测定破菌上清中的RubisCO酶活.结果表明:①cbbM基因编码461个氨基酸,与沼泽红假单胞菌株DCP3和DH1的RubisCO蛋白序列相似性分别为98%和99%;②推测沼泽红假单胞菌No.9中RubisCO蛋白的活性中心由Asn112、Lys192、Asp194、Glu195、His288、Arg289、His322、Gly424、Ser369、Gly370和Gly394等氨基酸残基组成;③重组蛋白分子量约为50kDa左右,与预测相符;④破菌上清中的RubisCO酶比活高于原始菌株中的酶活,说明目的基因在大肠杆菌中得到了有效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周集体	大连理工大学环境与生命学院	300	4304	34.0	44.0
2	杜翠红	集美大学生物工程学院	17	67	5.0	7.0
3	刘静雯	集美大学生物工程学院	23	156	7.0	11.0