高比活木聚糖酶XYN-W及其突变体在酵母中的高效表达

• 作者: 姚斌 柏映国 王亚茹 罗会颖 罗建杰 范云六 袁铁铮 黄火清
• 来源期刊: 中国农业科技导报
• 学科: 生物学
• 关键词: 木聚糖酶 毕赤酵母 XYN-W 高效表达 比活性改良
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 80-85
• 分类号: Q786
• 字数: 5737字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0864.2010.05.14

摘要

将来源于瘤胃真菌Neocallimastix frontalis的高比活木聚糖酶基因xyn-w整合到毕赤酵母表达载体pPIC9上,通过电击转化得到重组转化子.SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明,木聚糖酶基因xyn-w得到了高效分泌表达,在5 L发酵罐中木聚糖酶蛋白表达量达到1 mg/mL,酶活性达到13 000 IU以上.XYN-W的C端57个氨基酸序列为连接序列和锚定区域,利用PCR方法将此段序列去除,得到截短的木聚糖酶序列xyn-m.用相同方法构建高效表达XYN-M蛋白的毕赤酵母工程菌株,表达产物经纯化后进行酶学性质测定,结果表明,其比活为19 856.6 IU/mg,Kcat值为4 433.8 s-1,与纯化的XYN-W蛋白(比活性13 795.3 IU/mg、Kcat值2 717.1 s-1)相比,分别提高了43.9%和63.2%.