海参溶菌酶基因克隆及在毕赤酵母中的表达与纯化

• 作者: 丛丽娜 谷跃峰 骆宁
• 来源期刊: 大连工业大学学报
• 学科: 工学
• 关键词: 海参溶菌酶 毕赤酵母 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 317-320
• 分类号: TS254|Q786
• 字数: 3119字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-1404.2010.05.002

摘要

研究构建并筛选了具有抑菌活性的重组海参溶菌酶(Stichopus japonicus lysozyme,SJL)的毕赤酵母工程菌.从海参肠组织中提取总RNA,根据已经测得的SJL的基因序列(GenBank accession No. EF036468)设计引物,以总RNA为模板经RT-PCR获得目的基因,并将该基因与表达载体pPIC9K连接,构建重组质粒pPIC9K-SJL,再转化至毕赤酵母GS115中.利用MD、MM和含抗生素G418的YPD平板培养基筛选出表型为His+Muts的高拷贝阳性菌株.挑选具有抑菌活性的菌株进行甲醇诱导表达液体发酵,其上清液经硫酸铵沉淀、透析后得到溶菌酶粗品,再经CM52-纤维素阳离子交换柱进一步纯化,得到电泳纯的溶菌酶.结果显示,共筛选到7株有抑菌活性的重组酵母菌株,诱导72 h时表达量最高.SJL在毕赤酵母中得到成功表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丛丽娜	大连工业大学生物与食品工程学院	57	255	8.0	14.0
2	谷跃峰	大连工业大学生物与食品工程学院	2	8	2.0	2.0
3	骆宁	大连工业大学生物与食品工程学院	3	10	2.0	3.0