N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因的克隆与表达

• 作者: 冯磊 杨蕴刘 沈健 饶娆
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: N-乙酰神经氨酸/遗传学 果糖-二磷酸醛缩酶 大肠杆菌/遗传学 聚合酶链反应 克隆 分子 重组 遗传 转染 遗传载体 基因表达 重组蛋白质类
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 57-63
• 页数: 7页
• 分类号: Q55
• 字数: 3726字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2010.01.010

摘要

目的:为了获得N-乙酰-D-神经氨酸醛缩酶基因表达的两重组菌.方法:以大肠杆菌C600染色体DNA为模板,通过引物设计和PCR扩增,克隆获得编码Neu5Ac醛缩酶基因(nanA)的片段;以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化 E.coli BL21(DE3),然后将nanA基因片段组入到pDR540载体的Ptac启动子下游,所得重组菌 E.coli DH5α/pRY3的nanA基因在tac启动子控制下呈组成型表达.结果:DNA序列测定证明,该基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)大小为894 bp, 编码298个氨基酸组成的酶蛋白;SDS-PAGE显示,纯化的目的蛋白为33 kD的单一条带.以pET28b构建的nanA基因重组质粒pRY1转化 E.coli BL21(DE3),在得到的转化子 E.coli BL21(DE3)/pRY1中,nanA基因受lac启动子控制,无需IPTG或乳糖所诱导.在N-乙酰(-D)-神经氨酸醛缩酶固定化酶的催化下合成N-乙酰-D-神经氨酸的合成效率为78.3%,结晶回收率为90.2％,总回收率为70.6%.全波长扫描分析表明:本实验室结晶品与Sigma公司商品的全波长扫描图谱有相同的特征.结论:所构建的诱导型产酶菌株 E.coli BL21(DE3)/pRY1和组成型表达菌株 E.coli DH5α/pRY3都可较多量的产酶.合成的结晶品具有N-乙酰-D-神经氨酸的特征.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈健		40	219	9.0	13.0
2	冯磊	浙江大学医学院浙江林学院健康管理系	53	806	13.0	27.0
3	杨蕴刘	中科院上海植物生理研究所	2	0	0.0	0.0
4	饶娆	中科院上海植物生理研究所	2	0	0.0	0.0