鹅源草酸青霉CBHⅠ基因克隆及真核表达载体构建

• 作者: 岳斌 张倩 张名爱 王宝维 葛文华 黄国清
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鹅源草酸青霉 外切葡聚糖酶 TAIL-PCR
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 所属期刊栏目: 贮藏·保鲜·加工
• 页码范围: 1464-1472
• 页数: 9页
• 分类号: S6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.07.018

摘要

[目的]鹅源草酸青霉F67(Penicillium oxalicum Currie & Thom)纤维素酶二糖水解酶(cellobiohydrolase,CBHⅠ)基因克隆并构建真核表达载体,为该菌株分子特性的进一步研究及构建高效纤维素分解菌奠定基础.[方法]首先通过兼并PCR法扩增CBH Ⅰ基因片段,然后利用改良热不对称交错PCR(TAIL-PCR)技术克隆CBHⅠ基因5'端和3'端侧翼序列,最后采用RT-PCR法扩增鹅源草酸青霉F67 CBH Ⅰ基因序列全长,并对该基因进行生物信息学分析,构建pPIC9K真核表达载体.[结果]分别扩增到鹅源草酸青霉F67纤维素酶CBHⅠ基因片段A(EU574736)、5'端序列B1(EU603295)、3'端序列B2(EU652768)及全长基因C(EU727171),并成功构建真核表达载体pPIC9K-CBHⅠ;生物信息学分析表明,该基因蛋白序列与微紫青霉氨基酸序列同源性最高,达76%,前26个氨基酸为信号肽序列,疏水性可达2.63,由催化功能域、衔接区和真菌性纤维素结合域构成,其三级结构主要为β-sheet.[结论]鹅源草酸青霉纤维素酶CBH Ⅰ基因全长序列的克隆进一步丰富了丝状真菌的生物信息学资源;其真核表达载体的构建为将该菌株进一步在真核宿主中表达,从而获得高效工程菌株奠定了怂基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王宝维	青岛农业大学优质水禽研究所	176	1067	16.0	21.0
5	葛文华	青岛农业大学优质水禽研究所	74	514	13.0	16.0
6	黄国清	青岛农业大学食品科学与工程学院	74	420	12.0	17.0
7	张名爱	青岛农业大学食品科学与工程学院	87	602	13.0	17.0
8	岳斌	青岛农业大学优质水禽研究所	47	464	13.0	17.0
9	张倩	青岛农业大学优质水禽研究所	20	134	7.0	10.0