受PVY诱导的烟草天冬氨酸蛋白酶基因Ntasp的克隆与分析

• 作者: 刘贯山 周佳 孙玉合 杨爱国 王元英 陈帅
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 烟草 天冬氨酸蛋白酶 RACE 实时荧光定量PCR 马铃薯Y病毒
• 年，卷（期）: 2010,（16）
• 页码范围: 3331-3339
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.16.008

摘要

[目的]通过筛选并克隆烟草抗马铃薯Y病毒(Potsto virus Y,PVY)相关基因,分析其在不同诱导时间的相对表达量,揭示烟草抗病毒诱导的分子机理,以期为烟草抗病毒病育种奠定基础.[方法]通过抑制差减杂交和cDNA芯片从PVY诱导的抑制差减杂交文库中筛选上调表达(Ratio＞2)的基因中间片段,用RACE技术克隆其cDNA全长,并利用实时荧光定量PCR分析其在不同诱导时期的相对表达量.[结果]从受PVY诱导的烟草叶片中筛选一条595 bp的基因中问片段并克隆得到一个全长为1 770 bp的天冬氨酸蛋白酶基因Ntasp(GenBank登录号为60144571),该基因编码506个氨基酸.多序列比对结果显示,该基因的编码产物与其它植物天冬氨酸蛋白酶家族成员具有高度的同源性,具有植物天冬氨酸蛋白酶典型的结构特征.实时荧光定量PCR分析表明,Ntasp在PVY接种早期上调表达.[结论]克隆得到一个烟草天冬氨酸蛋白酶基因Ntasp,其表达受PVY侵染诱导.