NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体的构建与表达

• 作者: 唐小龙 庞雪云 欧财文 江振友 蓝锴
• 来源期刊: 暨南大学学报（自然科学与医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 腺病毒 神经元素3(NGN3) 成对盒基因4(PAX4) 间充质干细胞(MCS)
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 346-351
• 分类号: Q78
• 字数: 4313字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-9965.2010.04.004

摘要

目的:运用pADxsi系统构建带人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体.方法:采用基因克隆技术,将目的基因NGN3从pEGFP-N1-NGN3质粒上切下连到pShuttle-GFP-CMV上,替换GFP,得到pShuttle-CMV-NGN3;再将PAX4从pEGFP-N1-PAX4质粒上切下连到系统pShuttle-CMV-NGN3上,得到pShuttle-CMV-NGN3/CMV-PAX4穿梭质粒;最后将CMV-NGN3/CMV-PAX4从pShuttle-CMV-NGN3/CMV-PAX4转移到ADxsi骨架载体上,得到pADxsi-CMV-NGN3/CMV-PAX4病毒质粒,然后在293细胞中进行包装与扩增活性病毒,并进行病毒滴度测定.体外感染人脐带间充质干细胞.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)与免疫印迹(Western blotting)检测目的基因在细胞内的表达情况, 免疫细胞化学与间接荧光法检测目的分子在细胞内的定位.结果:酶切鉴定和PCR证明重组人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体构建正确;RT-PCR与Western blotting结果显示目的基因在细胞持续稳定表达;间接荧光与免疫化学表明重组腺病毒可高效感染人脐带间充质干细胞,且目的基因特异性地定位于细胞核内.结论:应用重组技术成功构建人NGN3与PAX4双基因表达腺病毒载体,且在间充质干细胞内持续而稳定表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	江振友	暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室	116	1081	15.0	27.0
2	欧财文	广东省中医院检验科	16	27	3.0	4.0
3	庞雪云	广东省中医院检验科	20	97	5.0	9.0
4	蓝锴	广东省中医院检验科	33	273	9.0	15.0
5	唐小龙	广东省中医院检验科	12	71	5.0	8.0