人内皮抑素-白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达与鉴定

• 作者: 冯晶晶 吕茂民 杨梅 章金刚 赵媛媛
• 来源期刊: 中国输血杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人内皮抑素 人血清白蛋白 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 血液制品研发专题
• 页码范围: 255-258
• 分类号: R457|Q813.2
• 语种: 中文

摘要

目的 构建编码人内皮抑素-白蛋白的融合基因,并在毕赤酵母(pichia pastoris)中获得高效表达.方法 通过重叠延伸PCR的方法,构建编码人内皮抑素-白蛋白的融合基因,并克隆至pGEM-T载体中,测序正确后,将其亚克隆至酵母表达载体pPIC9中,然后将鉴定正确的重组表达载体pPIC9/ES-HSA线性化后转化入GS115宿主菌.采用原位双膜法筛选高表达菌株,对高表达菌株进行扩大培养,将表达上清液盐析后分别经阳离子交换层析、阴离子交换层析和亲和层析纯化,获得了重组融合蛋白,采用MTY法测定融合蛋白中内皮抑素的活性.结果 成功构建了人内皮抑素-白蛋白融合基因和重组表达质粒pPIC9/ES-HSA,并筛选到表达较为理想的重组菌株pPIC9/ES-HSA/GS115,经甲醇诱导表达后纯化,融合蛋白的纯度达到92%以上,并具有抑制人血管内皮细胞系ECV-304细胞的增殖活性.结论 本方法可成功获得具有人内皮抑素生物活性的重组人内皮抑素-人血清白蛋白融合蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕茂民	军事医学科学院野战输血研究所	56	376	11.0	16.0
2	章金刚	军事医学科学院野战输血研究所	124	845	15.0	21.0
3	赵媛媛	军事医学科学院野战输血研究所	5	17	3.0	3.0
7	冯晶晶	军事医学科学院野战输血研究所	5	15	3.0	3.0
8	杨梅	军事医学科学院野战输血研究所	2	7	2.0	2.0