引物延伸预扩增结合简并引物PCR在单细胞比较基因组杂交分析染色体异常中的应用

• 作者: 卢光绣 徐芳 狄玉芬 程德华 谭珂 谭跃球
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 引物延伸预扩增 简并寡核苷酸引物-PCR 比较基因组杂交 全基因组扩增 单细胞
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 387-392
• 分类号: R3
• 字数: 4912字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9406.2010.04.006

摘要

目的 建立一种可信的单细胞全基因组扩增(whole genome amplification.WGA)技术,结合比较基因组杂交(comparative genomic hybridization,CGH)分析单细胞的染色体拷贝数变化,探讨其在胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)中的应用前景.方法 采用引物延伸预扩增结合简并核苷酸引物PCR(primer extension preamplification with degenerate oligonucleotide primed-PCR,PEP-DOP-PCR)的方法,扩增12个已知核型的单细胞标本(包括5个绒毛标本、4个干细胞标本和3个淋巴细胞标本)和4个经PGD检测发现染色体异常的单卵裂球标本,将扩增产物标记红色荧光染料后,与标记绿色荧光染料的正常DNA等量混匀,与正常中期分裂相进行比较基因组杂交分析.同时,应用单纯的简并寡核苷酸引物-PCR(DOP-PCR)扩增10个单细胞DNA,标记后进行CGH分析.比较两种单细胞全基因组扩增方法的扩增效率及随后用于CGH分析染色体拷贝数时的准确性.结果 所有的单细胞采用PEP-DOP-PCR扩增时,均能获得稳定均匀的PCR产物,片段大小范围在100～1000 bp之间,集中分布于400 bp左右的区域,CGH分析结果显示染色体拷贝数变化与其它技术检测的结果一致.而10个单纯的DOP-PCR扩增只有6个标本成功,扩增产物进行CGH分析时,杂交信号不均匀,有2个显示与其它技术分析的结果不一致.结论 PEP-DOP-PCR技术能有效地扩增单细胞的全基因组DNA,其扩增产物可应用CGH技术成功检测单个细胞的染色体拷贝数变化,而单纯的DOP-PCR技术易于出现扩增失败、扩增产物杂交后信号不均一的缺点.PEP-DOP-PCR全基因组扩增结合CGH技术在胚胎植入前遗传学诊断中有良好的应用前景.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐芳	中南大学生殖与干细胞工程研究所	12	38	4.0	6.0
2	程德华	中南大学生殖与干细胞工程研究所	7	39	3.0	6.0
3	狄玉芬	中南大学生殖与干细胞工程研究所	2	9	2.0	2.0
4	谭珂	中南大学生殖与干细胞工程研究所	4	14	3.0	3.0
5	谭跃球	中南大学生殖与干细胞工程研究所	25	119	6.0	9.0
6	卢光绣	中南大学生殖与干细胞工程研究所	13	36	4.0	5.0