核酸疫苗pcDNA3.1-EG95的构建及在绵羊胎儿成纤维细胞中的表达

• 作者: 李志伟 李洁 杨娇馥 湛奎 王志钢 郝慧芳 高连山
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 细粒棘球蚴 EG95基因 核酸疫苗
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 134-136,152
• 分类号: R71
• 字数: 2100字
• 语种: 中文

摘要

克隆细粒棘球蚴EG95基因cDNA并构建核酸疫苗pcDNA3.1-EG95.根据GenBank中细粒棘球蚴EG95基因序列(AF134378)设计引物并在上游引物起始密码子前加上Kozak序列(CCACC),提取细粒棘球蚴总RNA,RT-PCR扩增目的基因EG95 cDNA,扩增片段克隆到pcDNA3.1(+)中构建重组载体pcDNA3.1-EG95后测序.重组质粒pcDNA3.1-EG95采用脂质体法转染绵羊胎儿成纤维细胞并用G418筛选,RT-PCR检测稳定转染细胞中目的基因的转录.测序结果表明克隆的目的基因包含了471 bp的完整ORF并与载体连接正确.RT-PCR检测表明EG95基因在稳定转染的绵羊胎儿成纤维细胞中得到转录.成功构建pcDNA3.1-EG95核酸疫苗并可在绵羊胎儿成纤维细胞中转录目的基因,可进一步用于活体动物免疫研究.