日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32的构建及其在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达

• 作者: 吴成果 李文桂 罗兴建 肖邦忠 陈雅棠
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32 大肠埃希菌 表达
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究论著
• 页码范围: 147-152
• 页数: 6页
• 分类号: R378|R392.2
• 语种: 中文

摘要

目的 构建日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,分析该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达情况.方法 超声粉碎日本血吸虫成虫提取总RNA,通过RT-PCR扩增获得Sj26GST和Sj32抗原编码基因,然后采用基因拼接法(gene SOEing)剪接Sj26GST和Sj32,得到Sj26GST-Sj32融合基因,克隆至原核表达载体pET32α(+),构建重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,转化人大肠埃希菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western-blot对表达产物进行分析和鉴定.结果 基因拼接法扩增出约1991 bp的Sj26GST-Sj32融合基因;双酶切和PCR鉴定证实Sj26GST-Sj32融合基因成功插入pET32a(+)中,SDS-PAGE分析显示表达产物为分子质量约82000 Mr的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的22%;Westem-blot鉴定重组蛋白能被日本血吸虫感染的兔血清识别.结论 成功构建了日本血吸虫重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32,该质粒在大肠埃希菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李文桂	重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所	313	1230	16.0	20.0
2	吴成果		120	699	14.0	18.0
3	肖邦忠		132	909	16.0	21.0
4	罗兴建		107	528	11.0	14.0
5	陈雅棠	重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所	190	1020	16.0	23.0