重组人肿瘤坏死因子(hTNF-α)在大肠埃希菌[E.coli BL21(DE3)]中表达条件的优化

• 作者: 张丽洁 徐翠香 杨乐 王曦 靳占奎
• 来源期刊: 现代检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人肿瘤坏死因子α 质粒 大肠埃希菌 基因克隆
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 100-103,107
• 页数: 5页
• 分类号: R378.21|Q784
• 字数: 4131字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7414.2017.05.027

摘要

目的 构建人肿瘤坏死因子(hTNF-α)表达质粒,并对其进行鉴定,优化hTNF-α蛋白表达条件使之在大肠埃希菌中实现高效表达.方法 应用PCR扩增技术获得hTNF-α基因片段并进行相应的鉴定,将鉴定后的hTNF-α基因克隆到pET24a载体中,获得pET24a-hTNF-α表达质粒.将此质粒转化入大肠埃希菌BL21 (DE3)中,并对其表达条件进行优化.结果 成功构建了pET24a-hTNF-α质粒,PCR和酶切技术进行鉴定,结果显示与目的片段一致.将此质粒转入大肠埃希菌BL21(DE3)中,得到最佳表达条件为:M9+LB培养基,37℃,0.5 mmol/LIPTG,pH值=7.5,诱导时间为5h.优化后的菌体干重增高了2.56倍,hTNF-α产率增加3.68倍,hTNF-α表达率从9.38％增加到32.74％,增高了3.49倍.结论 优化了pET24a-hTNF-α质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达条件,使hTNF-α蛋白得到高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐翠香	陕西省人民医院陕西省临床检验中心	11	41	3.0	6.0
2	张丽洁	陕西省人民医院血液病研究室	18	49	3.0	6.0
3	靳占奎	陕西省人民医院骨科	16	67	5.0	7.0
4	王曦	西安市红会医院骨科	6	9	2.0	2.0
5	杨乐		3	7	2.0	2.0