日本血吸虫真核表达重组质粒PcDNA3-Sj26的构建及其在树突状细胞中的表达

• 作者: 刘娟 刘文琪 李雍龙 沈定文 龙小纯
• 来源期刊: 寄生虫与医学昆虫学报
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 树突状细胞 Sj26 真核表达 基因转染
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 著述
• 页码范围: 65-70
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 3641字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-0507.2005.02.001

摘要

本研究构建日本血吸虫26kDa谷胱苷肽转移酶(Sj26)基因的真核表达重组质粒(pcDNA3-Sj26),并探讨其在树突状细胞(DC)中的表达.采用PCR扩增Sj26基因片段,定向克隆至真核表达载体pcDNA3中,阳性克隆经双酶切、PCR扩增鉴定后,双脱氧链末端终止法进行序列测定.用脂质体介导DNA转染法将pcDNA3-Sj26转染DC,G418加压筛选获得阳性克隆并传代培养,用RT-PCR检测Sj26mRNA的转录水平,用SDS-PAGE、Western blot和间接免疫荧光法检测Sj26蛋白在DC中的表达.结果PCR扩增得到特异的Sj26基因片段,双酶切及PCR鉴定表明获得正确的pcDNA3-Sj26重组质粒;测序结果表明,核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank报道的Sj26的一致性均为99%;RT-PCR结果显示pcDNA3-Sj26转染的DC中有Sj26基因mRNA的表达,SDS-PAGE和Western blot、间接免疫荧光法显示pcDNA3-Sj26转染的DC中有Sj26的表达.结果证实构建的真核表达重组质粒pcDNA3-Sj26成功的转染至DC中并在DC中获得表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈定文	华中科技大学同济医学院病原生物学系	4	7	2.0	2.0
5	李雍龙	华中科技大学同济医学院病原生物学系	55	278	8.0	13.0
6	刘文琪	华中科技大学同济医学院病原生物学系	50	270	7.0	13.0
7	龙小纯	华中科技大学同济医学院病原生物学系	18	74	4.0	7.0
8	刘娟	华中科技大学同济医学院病原生物学系	74	343	9.0	16.0