猪精氨酸-丝氨酸蛋白激酶1(SRPK1)克隆表达及功能初步分析

• 作者: 俄广鑫 刘娣 崔羽 张冬杰 杨少成 杨秀琴 王嘉博 祝继原 谢宇彤
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 精氨酸/丝氨酸蛋白激酶1 猪 实时荧光定量PCR 反向PCR 骨骼肌损伤模型 生物信息学分析
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 1379-1386
• 分类号: S828|Q527
• 字数: 5405字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在阐明猪SRPK1基因的分子特点和表达谱.以大白猪为研究对象,利用RT-PCR技术克隆SRPK1基因CDS区域,同时利用反向PCR(inverse PCR,I-PCR)技术得到猪部分SRPK1的5'UTR序列;利用生物信息学方法分析SRPK1基因核苷酸序列及编码蛋白序列的结构特点;利用荧光定量PCR(real-time PCR)检测SRPK1在1和30日龄大白猪及杜洛克的心脏、肌肉、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、胃、小肠、大肠、脑的表达情况;构建猪骨骼肌损伤模型,研究在骨骼肌发育过程中SRPK1基因的表达特性.结果,将克隆片段拼接得到长2 499 bp的大白猪SRPK1基因序列,包含了1 968 bp完整CDS区域,分析表明其编码含656个氨基酸的蛋白质;包括2个P_Kc结构域,猪SRPK1蛋白序列与人和黑猩猩的相似性较高.通过生物信息学方法预测所得5'UTR含有多个转录结合位点:HSF1、HSF2、Ik-1、IK-2、SRY、SPI MyoD、USF、FAT、p300,CP2、RREB-1、E2F和AP-1.利用荧光定量PCR研究发现,表达结果显示猪该基因表达具有组织和种间特异性,主要都是在胃、大肠和小肠中表达.SR-PK1基因在整个损伤修复过程中的表达反复出现升高和降低.5'UTR处有多个和肌肉生长相关蛋白的转录结合位点,主要在消化系统组织表达,在骨骼肌修复中表达上调,推测其可能与骨骼肌细胞发育或其他肌肉生长相关因子的表达有关.