慢病毒载体介导的shRNA对小鼠T细胞CD28基因表达的影响

• 作者: 徐开林 桑威 程娜娜 陈翀
• 来源期刊: 徐州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: shRNA 慢病毒载体 CD28 移植物抗宿主病
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 309-313
• 分类号: R392.4
• 字数: 4067字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2065.2010.05.009

摘要

目的 探讨编码针对小鼠CD28的短发卡状RNA(short hairpin RNA, shRNA)的慢病毒载体对小鼠T细胞CD28基因表达的影响.方法 设计并合成3对靶向小鼠CD28的特异性干扰序列和1对非特异性干扰序列,亚克隆入慢病毒载体pLB中,构建出重组慢病毒干扰质粒,行PCR鉴定并进一步测序证实.分别将重组质粒与慢病毒包装质粒共转染293FT细胞, 生产慢病毒颗粒, 并依据绿色荧光蛋白(GFP)表达水平检测病毒滴度.慢病毒感染小鼠脾淋巴细胞,实时荧光定量RT-PCR和Western blot技术分别从mRNA水平和蛋白水平检测CD28的表达.结果 PCR鉴定及测序结果证实4种重组慢病毒质粒均构建成功,重组慢病毒滴度均达1×1011 U/L.感染T细胞后,CD28基因mRNA和蛋白表达量均有明显下降.结论 成功构建了CD28 shRNA慢病毒载体,可有效下调小鼠T细胞CD28 基因的表达,其为进一步研究体内沉默CD28基因控制移植物抗宿主病奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	桑威	徐州医学院移植免疫实验室	13	41	2.0	6.0
5	徐开林	徐州医学院移植免疫实验室	207	750	11.0	19.0
9	程娜娜	徐州医学院移植免疫实验室	1	0	0.0	0.0
10	陈翀	徐州医学院移植免疫实验室	44	149	5.0	10.0