昆虫细胞表达免出血症VP60蛋白间接ELISA方法建立及评价

• 作者: 刘家森 刘怀然 单安山 曲连东
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔出血症病毒 VP60基因 昆虫细胞 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 81-88
• 分类号: S852.61
• 字数: 6177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9369.2010.08.017

摘要

采用Bac-to-Bac系统表达的兔出血症病毒(RHDV)结构蛋白VP60作为包被抗原,建立抗体检测间接ELISA方法,并对方法性能进行测定.试验以整合有VP60基因的重组杆状病毒接种Sf9昆虫细胞,感染细胞经裂解、离心初步纯化,作为包被抗原建立了检测RHD抗体的间接ELISA方法.经过对反应条件和试剂的优化选择,初步组装成间接ELISA试荆盒,并对其整体性能进行了评价.结果表明,含重组VP60蛋白的Sf9细胞裂解液最适包被稀释度为1:2 000,换算为纯化VP60蛋白舍量约为1.7 μg·mL-1;待检血清最适稀释度为1:100;羊抗免IgG HRP标记抗体最适使用浓度为1:30 000.初步组装的ELISA试剂盒检测RHD阴性血清无假阳性反应,与其他常见免病阳性血清无交叉反应,特异性良好;敏感性高于RHDV全病毒间接ELISA和血凝抑制试验,低于进口间接ELISA试剂盒;试剂盒批内和批间变异率在10%以内.37℃加速破坏试验和4℃保存期试验结果表明试剂盒保存期可以稳定在6个月.该方法可应用于兔出血症抗体水平监测及实验兔等级检测中.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	单安山	东北农业大学动物科学技术学院	373	4210	32.0	45.0
2	刘家森	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心	14	103	6.0	10.0
3	曲连东	中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部实验动物质量监督检验测试中心	40	213	8.0	13.0
4	刘怀然	东北农业大学动物科学技术学院	23	161	8.0	11.0