鹅细小病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 杜秋明 高旭 鲁承
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鹅细小病毒 实时荧光定量PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 121-124
• 分类号: S835
• 字数: 3143字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-3268.2010.12.033

摘要

根据GenBank发表的鹅细小病毒(GPV)NS1基因序列设计合成了1对引物,以构建的含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测GPV核酸的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR方法.检测结果表明,该方法线性关系良好,标准曲线的相关系数达到0.998;对初始模板的检出下限为30个拷贝/μL,比常规PCR方法高100倍;与鸭瘟病毒、犬细小病毒、新城疫病毒和鹅副粘病毒均不发生交叉反应;组内与组间的变异系数均小于2%.用建立的Real-time PCR检测13例GPV感染阳性病例,GPV阳性检出率为100%.表明建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于GPV的病原检测及定量分析.