鼠抗人B7-2分子单链抗体基因的构建及其在家蚕中的表达

• 作者: 吴小锋 朱江 王文兵 胡静平 董海辉 邱玉华 陈永井 黄光镁
• 来源期刊: 蚕业科学
• 学科: 农学
• 关键词: B7-2蛋白 单链抗体 杂交病毒HyNPV 家蚕
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 274-281
• 分类号: S881.2|Q78
• 字数: 6418字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0257-4799.2010.02.012

摘要

B7-2蛋白为免疫球蛋白超家族(IGSF)成员之一.采用PCR法从分泌鼠抗人B7-2抗体的杂交瘤细胞株克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因,通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因间引入连接肽(Gly4Ser)3编码序列,体外构建抗人B7-2的鼠源单链抗体基因B7-2-ScFv.利用新型杂交病毒HyNPV的Bac-to-Bac表达系统,将B7-2-ScFv基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTa中,获得重组转移载体pFastBacHTa-B7-2-ScFv,转化大肠杆菌DH10Bac,获得重组杆粒Bacmid-B7-2-ScFv.将此重组杆粒的DNA转染Sf9细胞,获得重组病毒HyNPV-ScFv.感染该重组病毒的BmN细胞经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,至感染24 h时目的蛋白已有表达,96 h达到最高表达水平,表达产物的分子质量约31 kD.用该重组病毒感染家蚕5龄起蚕,感染后96 h蚕体表现出明显的发病症状.RT-PCR结果表明,5龄起蚕感染后48 h,在脂肪体内已有目的基因转录,一直持续到感染后120 h;SDS-PAGE和Western blotting分析表明,5龄起蚕感染96 h后方可在脂肪体中检测到目的蛋白表达.构建并在家蚕中成功表达鼠抗人B7-2单链抗体,为深入研究和开发该抗体奠定了基础.