(S)-酮基布洛芬拆分用脂肪酶基因的克隆及表达

• 作者: 刘瑞恩 张金红 许丽娟 赵玉红 赵运英
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 不对称拆分 (S)-酮基布洛芬 脂肪酶 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 108-113
• 语种: 中文

摘要

本实验室筛选出一株具有不对称拆分消旋酮基布洛芬氯乙酯的菌株NK13为材料,经鉴定为巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium.通过构建其基因文库,从中筛选得到阳性克隆重组子pUC-NK1.测序分析表明,该重组子质粒中包含-长度为633 bp的脂肪酶基因的完整开放阅读框,核苷酸同源性对比证明该脂肪酶基因属首次发现(GenBank Accession No.EU381317),将此基因克隆到原核表达载体pET21b(+)中构建重组表达质粒pET-NKestl,转化Escherichia coli BL21,经Isopropyl-β-D-Thiogalactoside(IPTG)诱导在宿主菌中得到表达,经SDS-PAGE电泳检测证明该脂肪酶成熟蛋白分子量约为20 kDa.薄层层析与HPLC检测结果显示,表达菌株转化外消旋酮基布洛芬氯乙酯得到(S)-酮基布洛芬过量(e.e%),由野生菌NK13的5.84%提高到75.28%,提高约15倍,说明该脂肪酶具有优先拆分得到(S)-酮基布洛芬的特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张金红	南开大学生命科学学院	65	440	11.0	17.0
2	赵玉红	南开大学生命科学学院	28	129	7.0	9.0
3	许丽娟	南开大学生命科学学院	6	25	4.0	5.0
4	刘瑞恩	南开大学生命科学学院	3	18	3.0	3.0
5	赵运英	南开大学生命科学学院	3	18	3.0	3.0