茎环引物的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测miR-155表达及其临床初步应用

• 作者: 李莉 林晓丹 温旺荣
• 来源期刊: 检验医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 微小RNA 逆转录聚合酶链反应 miR-155 SYBR GreenⅠ
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 分子生物学检验论著
• 页码范围: 296-300
• 页数: 5页
• 分类号: Q503
• 字数: 3916字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2010.04.014

摘要

目的 建立茎环状逆转录引物(简称茎环引物)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR),并作初步应用.方法 应用SYBR GreenⅠ实时FQ-PCR检测CD4+T细胞株的miR-155,初步验证方法 的可行性.用所建立的方法 对60份临床宫颈刮取物标本进行检测,分析miR-155与宫颈癌及感染的高危型人类乳头状瘤病毒(HPV)基因型别的关系,其聚合酶链反应(PCR)反应产物通过电泳验证产物特异性.结果 所建方法 能特异的检测到miR-155的扩增信号,最低检出限为10-7 nmol/L, 在10-1～10-6 nmol/L之间有良好的线性关系,相关系数(r)为0.99,扩增后惟一的熔解曲线特异峰显示很好的特异性.CD4+T细胞株及60例临床宫颈刮取物标本miR-155均显示阳性, PCR反应产物电泳可获得单一条带.宫颈刮取物miR-155与宫颈癌有关(P<0.05),但与本研究涉及的HPV基因型别无关(P>0.05).结论 所建立的茎环引物的SYBR GreenⅠ实时FQ-PCR能快速、敏感、特异地检测细胞株和临床宫颈刮取物miR-155的表达水平,为进一步研究miR-155及其临床应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林晓丹	暨南大学附属第一医院临床医学检验中心	11	62	4.0	7.0
2	李莉	暨南大学附属第一医院临床医学检验中心	39	320	11.0	15.0
3	温旺荣	暨南大学附属第一医院临床医学检验中心	55	393	12.0	16.0