副溶血性弧菌三种主要溶血毒素表达体系的构建研究

• 作者: 卢瑛 孙晓红 潘迎捷 翁仕强
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 副溶血性弧菌 溶血毒素 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2010,（12）
• 页码范围: 1081-1085
• 页数: 5页
• 分类号: R392.1
• 语种: 中文

摘要

目的 构建副溶血性弧菌三种主要溶血毒素(TDH、TRH和TLH)的重组融合表达体系,给后续这三种溶血毒素的大量获取及其特异性抗体的制备、副溶血性弧菌的致病机理等研究提供基础材料.方法 首先将副溶血性弧菌标准菌株tdh、trh与tlh基因分别接人克隆载体pGM-T,并转入E.coli TOP10,进行BamH Ⅰ、HindI Ⅱ双酶切鉴定和克隆测序.然后从重组克隆质粒中将tdh、trh与tlh基因目的片段分别双酶切出,将其连接到带His标签的表达载体pET30a(+)中后转入E-coli BL21(DE3)中,先通过BamH Ⅰ、HindI Ⅱ双酶切以鉴定所构建表达载体的准确性.接着重组表达菌株经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE电泳和Western-blotting来分析鉴定表达结果.结果 表达产物的SDS-PAGE电泳结果显示TDH在29 000、TRH在30 000、TLH在52 000附近处出现明显的表达蛋白条带.利用His标签的特异性抗体进行Weslern-bloting分析,实验结果显示29 000、30 000、52 000附近处的表达蛋白与His抗体均有特异性反应.结论 成功构建了TDH、TRH和TLH溶血毒素的原核表达体系,为进一步免疫原件和特异性抗体制备奠定基础.