hPAK4基因重组质粒的构建及蛋白表达

• 作者: 张红艳 李丰 李丹妮 李彦姝 王春玉 苏楠
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: PAK4基因 蛋白质印迹 融合蛋白
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 84-86,94
• 分类号: Q291
• 字数: 2623字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建hPAK4真核表达载体,证实融合蛋白在细胞内表达,融合蛋白可以用于GST-pulldown实验.方法 提取人乳腺癌细胞MCF-7 mRNA,反转录为cDNA.PCR扩增hPAK4全长编码基因,亚克隆至含有GST标签的真核表达载体中.将构建的重组质粒测序并转染到人胚胎肾细胞HEK293中,提取细胞蛋白进行Western blot检测,同时进行GST-pulldown实验.结果 hPAK4全长基因序列克隆到真核表达载体pEBG中,酶切鉴定片段为1 800 bp.Western blot检测到融合蛋白GSThPAK4的表达,分子量约为94 kDa,融合蛋白能够被Ghtathione Sepharose 4B沉淀.结论 成功构建了hPAK4全长基因真核表达载体,同时鉴定了GST-hPAK4融合蛋白的表达,并且能够被Glutathione Sepharose 4B沉淀.