携带HGF基因的重组腺病毒表达载体的构建

• 作者: 余卫 刘移民 刘薇薇 张成 李素梅 林琛莅 钟雪云 陈嘉榆 陈娟 陈运贤
• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: 重组腺病毒 肝细胞生长因子 基因治疗
• 年，卷（期）: 2010,（13）
• 页码范围: 1662-1664
• 分类号: R3
• 字数: 3021字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9448.2010.13.009

摘要

目的 构建携带肝细胞生长因子HGF的重组腺病毒表达载体.为研究HGF的功能、作用机制及临床应用奠定基础.方法 以pcDNA3.0-HGF为模板,经PCR扩增得到HGF基因,将其插入到带有绿色荧光蛋白基因的穿梭载体pAdTrack-CMV-GFP中,得到重组质粒pAdTrack-CMV-HGF-GFP.将线性化的pAdTrack-CMV-HGF-GFP与pAdEasy-1质粒共转化BJ5183感受态细胞,进行同源重组,得到重组腺病毒质粒,经PacI线性化后,转染AD293细胞.结果 得到重组腺病毒,转染重组腺病毒DNA的AD293细胞经荧光显微镜能观察到AD293细胞内有绿色荧光,且出现细胞病变反应(cytopathic effects,CPE),对传代的Ad-HGF进行PCR分析证实得到目的 基因,感染CHL细胞,通过western blotting分析HGF蛋白表达量,从而证实重组腺病毒载体构建成功.结论 腺病毒制备简便,成本低,周期短,毒性小,产量高,感染率及蛋白表达率高,成功构建Ad-HGF为进一步研究HGF并最终使其在临床应用中更为方便提供实验基础.