大豆种子不同发育时期全长均一化cDNA文库的构建

• 作者: 单志慧 周新安 周蓉 李晨 沙爱华 闫晓红 魏文辉
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 大豆 cDNA文库 均一化技术 表达序列标签
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 462-467
• 页数: 6页
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.03.003

摘要

[目的]为获得大豆种子发育相关基因,并为大豆基因组资源提供材料.[方法]采用SMART(switching mechanism at 5' end of RNA transcript)与DSN(duplex-specific nulease)均一化相结合的技术,构建了全长均一化cDNA文库,采用涂平板测定和PCR快速鉴定的技术分析文库质量,用3730测序仪对文库克隆进行测序.[结果]构建了大豆种子不同发育时期全长均一化cDNA文库,最大限度地获得了大豆种子不同发育阶段表达的基因序列,原始文库的库容为6.0×10~5cfu/mL,重组率接近100%,插入片段大小在0.6-2.0 kb之间,平均长度超过1.0 kb.经过大规模的质粒提取和测序,共得到了36656条高质量的EST序列,序列的平均读长在600 bp以上.[结论]经过EST序列拼接分析,整个文库有着很高的非冗余性.文库的代表性和重组片段的完整性均达到了分离筛选目的基因的建库要求.