APP基因真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的稳定表达

• 作者: 姜锐 孙立伟
• 来源期刊: 中国老年学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: APP 真核表达载体 阿尔茨海默病
• 年，卷（期）: 2010,（23）
• 页码范围: 3504-3506
• 分类号: Q291
• 字数: 2657字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9202.2010.23.037

摘要

目的 构建淀粉样前体蛋白(APP)基因真核表达载体,转染SH-SY5Y细胞,建立稳定转染细胞系.方法 从质粒pcDNAs-APP中经PCR扩增出APP基因,利用DNA重组技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经酶切和测序鉴定后,脂质体转染法转染SH-SY5Y细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,通过印迹法(Western blot)检测APP的表达. 结果 pcDNA3.1(+)-APP重组体经PCR扩增后片段大小约为2 300 bp,与预期相同.测序结果与目的序列相同,重组体载体构建成功.Western印迹检测到SH-SY5Y细胞中APP的表达. 结论 成功构建pcDNA3.1(+)-APP真核表达载体并稳定转染SH-SY5Y细胞,成功表达了目的基因,为进一步研究阿尔茨海默病分子学机制奠定了基础.