人BMI-1基因真核表达载体构建及其在人乳腺癌细胞系MDA-MB-468细胞中的表达

• 作者: 尹玉慧 李惠翔 王影利 邓青
• 来源期刊: 中医临床研究
• 学科: 医学
• 关键词: PcDNA3.1(+)-Bmi-1 Bmi-1 基因转染 MDA-MB-468 hTERT
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 所属期刊栏目: 肿瘤
• 页码范围: 98-101,103
• 分类号: R655.8
• 字数: 2933字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7860.2010.09.057

摘要

目的:构建人Bmi-1基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Bmi-1,转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-468细胞中并检测其表达.方法:RT-PCR检测Bmi-1 mRNA在乳腺癌细胞系MCF-7及MDA-MB-468细胞中的表达水平;从MCF-7细胞中提取总RNA,逆转录为cDNA,以cDNA为模板,扩增Bmi-1基因序列,将含有Bmi-1全长编码序列的PCR产物经TA克隆后经PCR、酶切验证,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Bmi-1,转化至大肠杆菌后,酶切、测序鉴定;将重组质粒转染到MDA-MB-468中,48h后RT-PCR检测转染前后Bmi-1 mRNA及hTERT mRNA的表达变化.结果:Bmi-1 mRNA在MCF-7细胞中表达较高,而在MDA-MB-468细胞中仅适量表达.成功从MCF-7细胞中克隆获得Bmi-1基因并构建真核表达载体.转染后在MDA-MB-468中检测到Bmi-1 mRNA表达上调,其过表达上调hTERT mRNA的表达.结论:成功克隆和建立人Bmi-1基因真核表达载体;pcDNA3.1(+)-Bmi-1能在MDA-MB-468中表达;为进一步研究Bmi-1基因在细胞中的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李惠翔	郑州大学基础医学院	74	256	8.0	10.0
2	尹玉慧	郑州大学基础医学院	18	57	4.0	7.0
3	王影利	郑州大学基础医学院	1	0	0.0	0.0
4	邓青		1	0	0.0	0.0