重组人GDNF基因逆转录病毒真核表达载体的构建及表达

• 作者: 刘雪平 孙志军 郭春红 陈睿
• 来源期刊: 中国老年学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 胶质细胞源性神经营养因子 逆转录病毒 脂质体 基因转染
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1398-1401
• 分类号: R742.5
• 字数: 5059字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9202.2010.10.036

摘要

目的 构建含有胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和加强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的逆转录病毒载体,将其导入包装细胞PT67,检测基因在细胞中的表达.方法 PCR法扩增GDNF基因及IRES2-EGFP基因,测序验证正确后与逆转录病毒载体pLXSN连接,构建重组逆转录病毒质粒pLXSN-IRES2-EGFP-GDNF.EcoR I酶切鉴定重组质粒.脂质体Lipofectamine 2000介导下转染包装细胞PT67,G418筛选并检测病毒滴度.流式细胞仪和荧光显微镜分别检测转染效率和基因表达.结果 PCR扩增得到大小约558 bp和1 308 bp的特异性条带,测序证实,获得正确的人GDNF序列和EGFP序列.经EcoR I酶切鉴定,成功构建重组质粒pLXSN-IRES2-EGFP-GDNF.荧光显微镜检测显示GDNF基因获得良好表达,流式细胞仪检测转染效率为24.4%.结论 正确克隆了人GDNF基因全序列并构建重组逆转录病毒pLXSN-IRES2-EGFP-GDNF质粒.基因转染包装细胞PT67获良好表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郭春红		15	25	3.0	4.0
2	刘雪平	山东大学山东省立医院老年神经科	49	212	9.0	11.0
3	陈睿		5	9	1.0	2.0
4	孙志军	山东医学高等专科学校基础医学部	10	61	4.0	7.0