中性纤维素酶β-葡萄糖苷酶基因的克隆表达及酶活测定

• 作者: 丁悦 吴金玲 薛宇峰
• 来源期刊: 数字技术与应用
• 学科: 工学
• 关键词: β-葡萄糖苷酶 诱导酶 酶活 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 学术论坛
• 页码范围: 173-174
• 分类号: TQ925
• 字数: 2004字
• 语种: 中文

摘要

本实验以一株产胞外中性纤维素酶的菌株芽孢杆菌CY110为研究对象,以麸皮为诱导物发酵获得了纤维素酶的限速酶组分-β-葡萄糖苷酶,酶的总活力和比活力分别达到了10568U和557.4U/mg,将产物分离纯化后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,在43kDa处得到了单一条带.利用RT-PCR方法从芽孢杆菌CY110中克隆出β-葡萄糖苷酶基因,将此目的基因连接到pBS-T载体后导人大肠杆菌DH5 α,测序得到的阳性克隆以载体pET-28a为表达质粒构建出重组质粒并转化到表达菌株BL21(DE3)中.IPTG诱导表达外源基因后测定酶活并对比原始发酵酶活.结果显示:目的基因大小为1398bp,该序列与GenBank中的β-葡萄糖苷酶基因ABQL01000004.1序列相比同源性达到99%,氨基酸序列同源性达到98%,将产物与pET-28a表达载体连接,经双酶切检验,证明原核表达载体构建成功.诱导表达后的β-葡萄糖苷酶比活力为370.21U/mg,高于原始发酵产生的β-葡萄糖苷酶比活力8%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁悦		2	2	1.0	1.0
2	吴金玲		15	6	1.0	2.0