大鼠Delta1基因真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 吴卫真 杨顺良 谭建明 郑凯
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 树突状细胞 Notch信号 Delta1 免疫耐受 移植 大鼠
• 年，卷（期）: 2010,（18）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 3331-3334
• 分类号: R318
• 字数: 4249字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.18.024

摘要

背景:最近有数据表明,Notch信号通路在外周移植免疫应答反应中发挥重要的调节作用,可以促进调节性T的分化,诱导抗原特异性的免疫耐受.推测Notch/Notch配体可能在MHC:TCR界面发挥作用.目的:构建大鼠Deltal基因(Notch配体)真核表达载体,并观察其在树突状细胞中的表达.方法:应用RT-PCR方法从大鼠骨髓细胞中获得全长Delta1基因片段,并将此基因片段构建在pcDNA3.1(+)真核表达载体上.利用脂质体基因转染技术将含大鼠Delta1基因片段的真核表达载体pcDNA3.1(+)/Delta1转染入树突状细胞中,观察Delta1基因在树突状细胞中的表达.结果与结论:双酶切鉴定结果显示,Delta1已成功构建在pcDNA3.1的Hindlll和Xbal双酶切位点之间,任选一个酶切阳性克隆pcDNA3.1/Deltal送上海生工生物公司进行序列测定,测序结果与Genebank中Delta1基因序列完全一致,阅读框正确.转染Delta1基因的树突状细胞形态与其亲本细胞类似,蛋白免疫印迹法检测到细胞内Deltal的表达显著增高.实验成功利用基因转染方法将Delta1基因导入树突状细胞,构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/Delta1,并使之高效表达并分泌Delta1蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴卫真	解放军南京军区福州总医院全军器官移植中心	9	50	4.0	7.0
2	杨顺良	解放军南京军区福州总医院全军器官移植中心	5	17	4.0	4.0
3	谭建明	解放军南京军区福州总医院全军器官移植中心	15	86	6.0	8.0
4	郑凯	解放军南京军区福州总医院全军器官移植中心	2	5	1.0	2.0