E2F-1真核表达载体的构建和Genectin抗性细胞的筛选

• 作者: 尹永硕 李雷 王长青 肖强 谢玉波
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 医学
• 关键词: E2F-1 胃肿瘤 MGC-803细胞 转染
• 年，卷（期）: 2010,（48）
• 页码范围: 19-21
• 分类号: R735.2|R73-35
• 字数: 2499字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2010.48.010

摘要

目的 通过构建含E2F-1基因的真核表达载体,转染胃癌细胞MGC-803,获得Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株.方法 PCR扩增E2F-1基因片段,经限制性内切酶 EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切后将E2F-1定向克隆到真核表达载体pCMV-HA2中转化筛选.用脂质体Lipofectamine 2000将该载体转染MGC-803胃癌细胞,然后用含G418的培养基筛选获得具Genectin抗性的过表达E2F-1的胃癌细胞株.RT-PCR和Western blot技术检测MGC-803/E2F-1细胞内E2F-1表达情况.结果 重组载体pCMV-E2F-1-HA2经EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切后得到预期片段,测序结果与报道的E2F-1基因完全一致.获取具Genectin抗性的细胞克隆,并进行了扩增.RT-PCR和Western blot证实重组载体pCMV-E2F-1-HA2成功转入胃癌细胞内,并稳定过表达E2F-1.结论 成功获取具Genectin抗性的稳定过表达E2F-1的胃癌细胞株,为下一步的功能实验奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李雷		27	95	6.0	7.0
2	谢玉波		154	576	10.0	13.0
3	肖强		104	361	9.0	11.0
4	王长青		5	13	2.0	3.0
5	尹永硕		1	0	0.0	0.0