抗人CD80双价抗体的构建、表达及生物学功能初步研究

• 作者: 张彦军 朱华亭 邱玉华 郭静雅 陈昌友 黄莉 黄赛男
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: CD80 双价抗体 真核表达
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 192-196
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 语种: 中文

摘要

构建及表达抗人CD80双价抗体(dimeric antibody fragment,diabody),并初步研究其生物学功能.PCR法获得轻重链可变区基因,构建表达载体pIRES2-EGFP/diabody.将pIRES2-EGFP/diabody转染中华仓鼠卵巢细胞(CHO),G418加压,筛选稳定高表达细胞株,扩大培养并收集上清,经镍柱纯化,并经变性及非变性SDS-PAGE电泳对抗体分子的双体性进行鉴定.采用免疫荧光及流式细胞术(FCM)分析抗体与细胞膜型CD80分子的结合活性及与鼠源性亲本抗体4E5的竞争抑制效应;MTT法分析该抗体对天然高表达CD80的Raji细胞体外增殖的影响.结果:成功构建抗人CD80-diabody表达载体并含有编码信号肽和Gly4Ser连接肽的序列.获得了稳定分泌双价抗体的细胞株(命名为SA-Ⅲ),培养上清中纯化抗体的得率为50 mg/L,PAGE结果显示其为一个二聚体,Mr约为53 000(抗人CD80-ScFv Mr约为27 000).抗CD80-diabody与L929-CD80、Raji及Daudi的阳性结合率分别为96.5%、98.1%及93.0%;该抗体对鼠源亲本抗体4E5与抗原结合的抑制率为97.11%,对Raji细胞体外增殖的抑制率达31.27%.与单链抗体相比,亲和活性明显提高.成功建立了抗CD80 diabody CHO细胞的表达株,其分泌的抗体具有良好的生物学活性.