重组分泌型TRAIL腺病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 刘世海 刘相萍 姚如永 王衍刚 窦以河 隋爱华
• 来源期刊: 齐鲁医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: TNF相关凋亡诱导配体 重组腺病毒 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 494-496,498
• 分类号: Q78
• 字数: 2757字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建表达分泌型肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体( TRAIL)基因的重组腺病毒载体.方法 采用PCR技术从人肝脏cDNA文库中扩增出编码114～281位氨基酸的TRAIL基因片段.将扩增的TRAIL插入含有分泌性信号肽IL-2的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-IL-2中,将其命名为pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL.pAdTrack-CMV-IL-2-TRAIL经Pme Ⅰ线性化后,电转化入转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞.筛选重组腺病毒质粒pAd-sTRAIL.经HEK293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒Ad-sTRAIL,氯化铯密度梯度离心纯化AdsTRAIL病毒,并测定病毒滴度.采用RT-PCR法和免疫荧光技术分别检测目的基因的表达.结果 纯化后的Ad-TRAIL病毒滴度为3.12×1015 pfu/L.经RT-PCR扩增出长104 bp的基因片段.免疫荧光检测到了目的基因在U251细胞的高效表达.结论 成功构建了重组分泌型TRAIL腺病毒载体,为下一步应用于脑肿瘤的基因治疗打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姚如永	青岛大学医学院附属医院中心实验室	108	506	12.0	16.0
2	隋爱华	青岛大学医学院附属医院中心实验室	92	345	10.0	12.0
3	刘相萍	青岛大学医学院附属医院中心实验室	61	180	7.0	8.0
4	窦以河	青岛大学医学院附属医院神经外科	23	42	4.0	5.0
5	王衍刚	青岛大学医学院附属医院神经外科	4	9	2.0	3.0
6	刘世海	青岛大学医学院附属医院中心实验室	19	43	4.0	5.0