mFVII/Fc融合基因慢病毒载体的构建及在hBMSCs中表达的研究

• 作者: 余刚 刘胜来 汪新辉 汪泱 熊礼生 王共先 薛金雄 陈捷
• 来源期刊: 中华泌尿外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 凝血因子VII与Fc片段 人骨髓间充质干细胞 融合基因 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 339-343
• 分类号: R737.25
• 字数: 3651字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6702.2011.05.017

摘要

目的 构建人凝血因子VII(FVII)与免疫球蛋白Fc片段融合基因(mFVII/Fc)的慢病毒表达载体,并检测其在人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中的表达情况,获取mFVII/Fc稳定表达的干细胞载体.方法 体外克隆人凝血因子VII,用点突变技术在基因水平将341部位Lys突变为Ala后,利用DNA连接酶与免疫球蛋白IgG1 Fc片段的基因融合,经酶切整合,测序鉴定后转染人胚肾293T细胞包装为重组mFVII/Fc慢病毒载体,鉴定载体构建成功后,测定慢病毒滴度.确定转染第三代hBMSCs的最佳MOI值后批量转染,荧光显微镜下观察GFP的表达情况,RT-PCR、ELISA分别在不同时间点对mFVII/Fc的mRNA及蛋白表达进行相对定量分析.结果 所构建融合基因与GenBank ID,AF272774对比,除同义变异外完全相符;包装的慢病毒滴度为2×108TU/ml;hBM-SCs鉴定结果为CD+29(98.08%)、CD+44(97.63%)、CD34(0.31%)、CD+45(0.58%);转染hBMSCs 72 h后的效率为(84±3)%,经RT-PCR及ELISA证实转染mFVII/Fc基因的hBMSCs有大量mRNA转录和蛋白表达水平.结论 实验成功获得了融合基因的hBMSCs稳定遗传表达载体,为靶向前列腺癌组织因子研究及肿瘤基因治疗研究提供了实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	汪泱	南昌大学第一附属医院泌尿外科泌尿外科研究所	71	219	8.0	12.0
2	王共先	南昌大学第一附属医院泌尿外科泌尿外科研究所	110	537	12.0	19.0
3	熊礼生	南昌大学第一附属医院泌尿外科泌尿外科研究所	12	44	3.0	6.0
4	陈捷	南昌大学第一附属医院泌尿外科泌尿外科研究所	33	112	6.0	9.0
5	刘胜来	南昌大学研究生院医学部	4	7	2.0	2.0
6	汪新辉	南昌大学研究生院医学部	1	1	1.0	1.0
7	余刚	南昌大学研究生院医学部	3	5	1.0	2.0
8	薛金雄	南昌大学研究生院医学部	5	6	1.0	2.0