P253R突变型FGFR2Ⅲc胞外段的表达、复性及活性研究

• 作者: 何水连 何颖 刘雪婷 喻志红 张志成 汪炬 王丁丁 陈安安
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 可溶性成纤维细胞生长因子受体2 包涵体 复性 转化生长因子-2
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 475-480
• 页数: 6页
• 分类号: Q812
• 语种: 中文

摘要

成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)具有促进细胞增殖,诱导新生血管形成等重要生理作用,与肿瘤的发生及发展也有十分密切的关系.P253R是Apert综合症中发现的一种突变,可使FGFR2Ⅲc与FGF2亲和力大大增加,从而导致过度自分泌和旁分泌活性,引起骨骼发育异常.从人胎盘组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到野生型FGFR2Ⅲc胞外段基因片段(wsFGFR2)；再利用重叠延伸法以wsFGFR2基因片段为模板扩增得到P253R突变型FGFR2Ⅲc胞外段基因片段(msFGFR2,P253R是Apert综合征中发现的一种突变,可使FGFR2与FGF2亲和力大大增加).msFGFR2基因克隆到pET3c载体,并在大肠杆菌BL21 (DE3)中以包涵体的形式表达.经凝胶层析复性和肝素亲和层析纯化得到复性成功的活性蛋白,复性率为12％,纯度大于95％.MTF结果表明,msFGFR2能显著抑制FGF2促NIH3T3细胞增殖能力,并抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,提示msFGFR2能有效阻断FGFs的细胞内信号通路,具有很好的产业化和临床应用前景.