内耳相关基础研究专辑基于聚酰胺胺的非病毒载体携带Math1基因进行体外基因转导的有效性和安全性评价

• 作者: 任丽丽 刘会占 吴南 吴雁 李敏 杨仕明 杨伟炎 陈志婷
• 来源期刊: 中华耳科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因转导 聚酰胺胺树枝状聚合物 Math1 活化 环糊精修饰
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 内耳相关基础研究专辑
• 页码范围: 258-263
• 分类号: R349.83
• 字数: 4430字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-2922.2011.03.005

摘要

目的 研发一种可用于携带Mathl基因进行基因转导的基于聚酰胺胺树枝状聚合物(PAMAM Dendrimers,PAMAM)的非病毒载体,对其转导效率和安全性进行评价,为进一步在体基因治疗奠定必要的实验基础和理论依据.方法 PAMAM(7代)通过加热活化和环糊精(Cyclodextrin,CD)表面修饰后,与pRK5-Math1-EGFP 质粒在不同氮磷比(N/P)的情况下,浮配形成基因-载体复合物,在无血清培养条件下,对HEK-293T细胞系进行体外基因转导,对其转导效率和安全性进行评价.加热活化温度设定为60℃,时间分别为:0、6、12、24、48小时；聚酰胺胺树枝状聚合物/环糊精质量比(PAMAM/CD)分别为:(1/2,1/1,4/1,8/1和无CD)；N/P分别为:1/1,2/1,5/1和10/1.通过荧光倒置显微镜观察EGFP阳性细胞并计算百分比的方法评价基因转导有效率,通过标准MTT实验评价其安全性.结果 通过60℃加热活化24小时、质量比为1/1进行环糊精表面修饰后获得的基于PAMAM的非病毒基因载体,携带pRK5-Math 1-EGFP质粒进行基因转导的效率最高,达到38.14±2.85％,同时其细胞存活率达到68.86±3.44％.结论 我们获得了一种基于PAMAM的非病毒基因载体,可高效、安全地携带Math1进行基因转导,为其下一步进行在体基因转导研究奠定了必要的实验基础,有望未来应用于临床的聋病基因治疗.