hVEGF121基因真核表达载体的构建及其在神经干细胞中的表达

• 作者: 周华东 张猛 李静 王延江 邓娟
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人血管内皮生长因子基因 真核表达载体 神经干细胞 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 36-39
• 分类号: R322.8|R394-33|R394.2
• 语种: 中文

摘要

目的 构建真核表达载体pEGFP-N1/hVEGF121,并转染神经干细胞(neural stem cells,NSCs),以探究人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,hVEGF121)基因导入NSCs的表达变化.方法 分离培养胎鼠NSCs,并行nestin、GFAP免疫染色鉴定.采用PCR法,以hVEGF121质粒为模板,扩增hVEGF121全长编码序列,克隆入载体pMD18-T,随后又将其亚克隆入pEGFP-N1载体中,构建其真核表达载体pEGFP-N1/hVEGF121,并以Fugene 6介导转染,将hVEGF121导入NSCs.倒置显微镜检测转染后的NSCs生长变化及hVEGF121在其中的表达等情况.图像分析技术计算转染效率.RT-PCR法对hVEGF121转染的NSCs进行鉴定.结果 成功分离培养到NSCs,并予以鉴定.构建了hVEGF121的真核表达载体pEGFP-N1/hVEGF121,成功地将hVEGF121转染NSCs,其转染效率约50%.被转NSCs生长良好.转染hVEGF121基因的NSCs被诱导分化后,神经球的轴突和轴丘表达神经元标志物NF-200.结论 成功地将hVEGF121克隆到pEGFP-N1载体中,并实现了hVEGF121基因在NSCs的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周华东	第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科	204	1788	21.0	30.0
2	张猛	第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科	57	484	14.0	18.0
3	王延江	第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科	88	556	13.0	18.0
4	邓娟	第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科	46	545	14.0	22.0
5	李静	第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科	77	581	13.0	20.0