应用双质粒共表达体系提高融合蛋白GGH在毕赤酵母GS115中的表达量

• 作者: 张晓梅 王慧 窦文芳 许正宏 许泓瑜
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 融合蛋白GGH 双质粒 毕赤酵母 荧光定量PCR Western blotting
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 983-989
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

为实现人胰高血糖素样肽-1-人血清白蛋白融合蛋白((GLP-1A2G)2-HSA,简称GGH)的规模化制备,通过pPICZαB与pPIC9K双质粒共表达体系提高融合蛋白GGH在毕赤酵母中的表达量.首先运用PCR技术扩增出融合蛋白GGH的基因片段,构建了表达质粒pPICZαB-ggh,并电转至经载体pPIC9K-ggh异位整合的GGH分泌型菌株-毕赤酵母GS115/F2；然后采用免疫学方法并结合高浓度抗生素筛选获得高产菌GS115/F3,在30℃,3％甲醇诱导80 h后GGH的表达量达到了491 mg/L,较GS115/F2提高了49.7％,通过荧光定量PCR发现GGH基因拷贝数在含有双质粒体系的GS115/F3中较出发菌株GS115/F2提高了26.7％.Western blotting杂交表明融合蛋白同时具有人血清白蛋白和人胰高血糖素样肽-1的抗原性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许正宏	江南大学医药学院制药工程研究室	241	1740	20.0	30.0
5	窦文芳	江南大学医药学院制药工程研究室	55	278	10.0	13.0
6	张晓梅	江南大学医药学院制药工程研究室	53	428	11.0	18.0
7	许泓瑜	江南大学医药学院制药工程研究室	77	764	14.0	23.0
8	王慧	江南大学医药学院制药工程研究室	12	60	5.0	7.0