抗克伦特罗单链抗体在毕赤酵母GS115中的表达

• 作者: 何永盛 徐小艳 王弘 陆田珍 陈舒迟
• 来源期刊: 食品工业科技
• 学科: 工学
• 关键词: 克伦特罗 单链抗体 毕赤酵母 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 217-219,236
• 分类号: TS201.3
• 语种: 中文

摘要

构建表达抗克伦特罗单链抗体(CBL scFv)的毕赤酵母菌株,筛选高拷贝转化子并诱导CBL scFv在毕赤酵母中的分泌表达.将构建的含有CBL scFv基因的重组真核表达载体pPICZαA-CBL经BstX Ⅰ酶切线性化后,利用电转化方法转化毕赤酵母菌GS115感受态细胞,通过Zeocin抗性平板筛选高拷贝转化子,以甲醇诱导蛋白表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blotting鉴定及ELISA活性分析.结果显示,通过筛选出的重组毕赤酵母菌株分泌表达了1个分子量约为41kDa的蛋白,该蛋白可与鼠抗His标签单克隆抗体发生特异性结合,且可被游离的CBL竞争性抑制,IC50值为5.1ng/mL.经检测,重组抗体表达量为0.095S/L.这说明分泌表达CBL scFv的毕赤酵母菌株构建成功,为后期CBL scFv发酵与制备奠定了基础.