微小毛霉凝乳酶基因的克隆及在毕赤酵母GS115中的表达

• 作者: 井庆川 刘瑞亭 刘辉 刘雪兰 张桂芝 武彬 石天虹 魏祥法
• 来源期刊: 山东农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 凝乳酶 毕赤酵母 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2009,（11）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 1-4,15
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 2971字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4942.2009.11.001

摘要

以微小毛霉基因组为模板,PCR扩增得到凝乳酶结构基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,连接穿梭载体pPIC9K,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,并测定其核苷酸序列.测序结果证实扩增得到的片段为凝乳酶基因,与GenBank报道的序列(No.X06219)存在6对碱基的区别.将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,构建重组菌P. pastoris GS115/pPIC9K-mcp,通过筛选得到抗G418浓度达到3.0 mg/ml、具有多拷贝基因的整合重组菌pPIC9K-mcp-03.用甲醇诱导进行初步发酵试验,测得该重组菌凝乳酶活力为5 660 U/ml,比微小毛霉发酵液提高50多倍,且发酵液电泳结果表明毕赤酵母自身分泌的蛋白很少,只能看到约38.5 ku的凝乳酶蛋白条带.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	魏祥法	山东省农业科学院家禽研究所	124	363	9.0	15.0
2	石天虹	山东省农业科学院家禽研究所	87	407	13.0	17.0
3	张桂芝	山东省农业科学院家禽研究所	21	235	7.0	14.0
4	刘雪兰	山东省农业科学院家禽研究所	84	368	10.0	16.0
5	井庆川	山东省农业科学院家禽研究所	73	328	10.0	15.0
6	武彬	山东省农业科学院家禽研究所	23	79	5.0	8.0
7	刘辉	山东省农业科学院家禽研究所	29	230	8.0	15.0